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地塞米松(DEX)ELISA试剂盒

地塞米松(DEX)ELISA试剂盒

简要描述:

购买本公司Elisa试剂盒可享受免费代测服务!订购试剂盒时,请确定好种属,样本种类以及选择好是要定性检测的试剂盒还是定量检测的试剂盒.如有疑问,我司在线客服人员.

1地塞米松(DEX)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

1 使用目的:

本试剂盒用于动物(猪,牛等)组织,血清及尿液中地塞米松(DEX)浓度的定量检测。

2 实验原理

本试剂盒采用直接竞争ELISA 方法,在微孔板包被有地塞米松(DEX)偶联抗原,加

入地塞米松(DEX)标准品或样品,游离地塞米松(DEX)与微孔条上预包被的地塞米松

(DEX)偶联抗原互相竞争抗地塞米松(DEX)抗体酶标记物,用TMB 底物显色,加入终

止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm 波长下进行检测,吸光值与样品中地塞米

松(DEX)含量成反比,通过标准曲线计算样品中地塞米松(DEX)的含量。

地塞米松(DEX)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒3 试剂盒组成

3。1 预包被的地塞米松(DEX)偶联抗原的可拆酶标板:1 块(12 孔×8 条)。

3.2 地塞米松(DEX)标准品:6 瓶(1ml/瓶),含量分别是:0μg/ml,0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04

μg/ml,0.08μg/ml,0.16μg/ml

3.3 抗地塞米松(DEX)抗体酶结合物:1 瓶(6ml)。

3。4 显色液A:1 瓶(6ml)。

3.5 显色液B:1 瓶(6ml)。

3。6 终止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

3。7 样本稀释液:1 瓶(10×, 6ml),用于样品稀释用。

3.8 浓缩洗涤液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

3.9 说明书一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 设备

4.1.1波长450nm酶标仪。

4。1。2粉碎机。

4。1。3量筒。

4。1。4振荡器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。

4.1.7微量移液器。

4.2 试剂

爱波网4.2.1去离子水或蒸馏水。

4.2.2 甲醇。

地塞米松(DEX)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒5 贮存

5。1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻

5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存

6 注意事项

6。1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

6.2 不要使用过期试剂盒。

2

6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

6。4 标准品中含有地塞米松(DEX),使用时应特别注意,操作时应带手套。

6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。

6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。

6。7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响

爱波网实验结果。

6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果

6.9 混合试剂时应避免起泡。

7 工作液准备

7.1 地塞米松(DEX)标准品溶液:0μg/ml,0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04μg/ml,0.08μg/ml,0.16

μg/ml

7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

7.3 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用

7.3 显色剂:已备用,避免光线直照

7.4 反应终止液:已备用

爱波网8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则

会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

爱波网8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2强力振荡3分钟

爱波网8.3用Whatman No 1滤纸过滤

8。4取25μl处理后的样品,加入25μl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2)

9 酶免分析步骤

9。1 实验须知

9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室

温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。

9。1。2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存

9.1.3 请不要改变分析程序

爱波网9。1。4 请使用精确的微量移液器

9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序

9。1。6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作

9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样

9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面

9.2 分析步骤

9。2。1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测

9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

9。2。4 在B0孔中加入50μl0。0 ng/ ml标准品溶液

9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液

9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗地塞米松(DEX)抗体酶结合物

9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。

9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液

3

体。

9.4 反应

9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl显色液A,再加 50μl显

爱波网色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀

9.4.2 37℃温浴10min

9。4。3 每孔中加入50μl终止液,混匀

9。4。4 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。

地塞米松(DEX)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒10 结果计算

10.1定量分析

10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以*个标准(0标准)

的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

爱波网B0—0μg/L标准溶液的平均吸光度值

10。1。2以地塞米松(DEX)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根

爱波网据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为地塞米松(DEX)浓度的对

数值,求得反对数即为测定液中地塞米松(DEX)浓度C(μg/ml)

10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释

倍数。

10.2 半定量测定

10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光

度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

爱波网10。1。2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色

深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11 特异性

物质 交叉反应

地塞米松(DEX) 100%

12 试剂盒参数

本试剂盒检测下限为0。01μg/ml

B0吸光度zui佳值应大于1.0

试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。

用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。

13

试剂盒提供的标准曲线范围为0.01μg/ml ~0.16μg/ml l。

14 分析限制

本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。

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